SDS-PAGE蛋白電泳套裝 NobleRyder P0400
北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)SDS-PAGE蛋白電泳套裝 NobleRyder P0400量大優(yōu)惠，咨詢(xún) ：
SDS-PAGE蛋白電泳套裝 NobleRyder P0400
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北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū)，是一家專(zhuān)業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)耗材及實(shí)驗(yàn)儀器研發(fā)、銷(xiāo)售、服務(wù)為一體的生物科技公司，公司主要經(jīng)營(yíng)的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas（MBI）, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等；產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測(cè)常用試劑、實(shí)驗(yàn)室常用耗材及儀器。
SDS-PAGE蛋白電泳套裝 NobleRyder P0400
SDS-PAGE蛋白電泳套裝
名稱(chēng) | 規(guī)格 | 保存條件 |
5×蛋白上樣緩沖液（含DTT） | 1ml | -20度 |
Tris-甘氨酸蛋白電泳緩沖液 | 一包（10L） | RT |
30%丙烯酰胺（29:1） | 100mlX2 | 2-8度 |
1.5mol/LTris（pH8.8） | 100mlX2 | RT |
1.0mol/LTris（pH6.8） | 60ml | RT |
過(guò)硫酸銨干粉 | 2g | RT |
10%SDS | 10ml | RT |
TEMED | 1.5ml | RT |
說(shuō)明書(shū) | 一份 | 一份 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本公司提供的蛋白電泳套裝包含凝膠制備，蛋白上樣緩沖液及蛋白電泳上樣緩沖液。
本公司生產(chǎn)的SDS-PAGE蛋白電泳套裝是按照經(jīng)典方法配制而成。本套裝根據(jù)電泳體系的大小，可進(jìn)行約50次左右。
使用說(shuō)明：
一，前期工作：蛋白提取及定量。
二，蛋白上樣液的制備：蛋白上樣緩沖液解凍，輕輕混勻，按4體積蛋白樣品加入一體積的5×蛋白上樣緩沖液，混勻，沸水中水浴5分鐘。
三，電泳液的配制：將一包電泳液干粉全部倒入1L－2L的燒柄中，加一定量的水溶解成2L配成5×Tris-甘氨酸蛋白電泳緩沖液，用前再稀釋5倍或者先配成1L成為10×Tris-甘氨酸蛋白電泳緩沖液，用前再稀釋10倍。
四，取10-15支1.5ml離心管，將過(guò)硫酸銨干粉分裝成100mg/支，標(biāo)記好備用。
五，凝膠制備：
1， 取一支稱(chēng)好的100mg過(guò)硫酸銨干粉，加入1ml蒸餾水，混勻，此配好的10%過(guò)硫酸銨溶液2－8度可保存一周，一周后請(qǐng)用新的。洗干凈電泳玻璃板，夾好。
2， 根據(jù)目標(biāo)蛋白分子量大小，選取凝膠濃度，按下表配制。先配分離膠，再配濃縮膠。
| 分離膠15% | 分離膠12% | 分離膠10% | 分離膠8% | 濃縮膠（5%） |
總體積 | 10ml | 10ml | 10ml | 10ml | 5ml |
30%丙烯酰胺（29:1） | 5ml | 4ml | 3.3ml | 2.7ml | 0.83ml |
1M Tris-HCL （PH6.8） | 0 | 0 | 0 | 0 | 0.625ml |
1.5M Tris-HCL（PH8.8） | 2.5ml | 2.5ml | 2.5ml | 2.5ml | 0 |
10%SDS | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | 50ul |
ddH2O | 2.3ml | 3.3ml | 4.0ml | 4.6ml | 3.42ml |
10%過(guò)硫酸銨 | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | 75ul |
TEMED | 10ul | 10ul | 10ul | 10ul | 7.5ul |
注意：
1，TEMED和10%過(guò)硫酸銨zui后加，在加入前需混勻前面所加試劑。10%過(guò)硫酸銨在4℃有效期為一周，TEMED易揮發(fā)，使用后請(qǐng)蓋緊瓶蓋。在常溫下膠30分鐘內(nèi)可以凝固，如溫度過(guò)低，可放37℃溫箱凝固。灌完分離膠后，輕輕的加1ml ddH2O封上層，膠凝固后可見(jiàn)到分界線(xiàn)。灌濃縮膠前，先傾去水層，再用吸紙吸干。濃縮膠灌好后立刻插入梳子。濃縮膠凝固后，放入電泳液中（讓電泳液漫過(guò)加樣孔），輕輕的撥出梳子，可防加樣孔變形。
2，配制量可按上表等比加減。如果所用膠濃度與上面不同，可自行調(diào)整，主要是調(diào)整30%丙烯酰胺的量（需要濃度×總體積/30%），zui后用水補(bǔ)足總體積。
六，上樣，電泳，一般是濃縮膠80V，分離膠120V恒壓，等溴酚蘭電泳到合適的位置，結(jié)束電泳，染色或者進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
附：SDS-PAGE分離膠的濃度與*分離范圍
SDS-PAGE分離膠濃度 | *分離范圍 |
6%膠 | 57-212kD |
8%膠 | 36-94kD |
10%膠 | 20-80kD |
12%膠 | 12-60kD |
15%膠 | 10-43kD |
配制6%的PAGE分離膠
成分 | 所需各成分的體積（毫升） | |||||
凝膠體積 | 5 | 10 | 15 | 20 | 25 | 30 |
蒸餾水 | 2.6 | 5.3 | 7.9 | 10.6 | 13.2 | 15.9 |
30%丙烯酰胺混合液 | 1.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 5 | 6.0 |
1.5mol/L Tris（pH8.8） | 1.3 | 2.5 | 3.8 | 5.0 | 6.3 | 7.5 |
10%SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 |
10%過(guò)硫酸銨 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 |
TEMED | 0.004 | 0.008 | 0.012 | 0.016 | 0.02 | 0.024 |
配制8%的PAGE分離膠
成分 | 所需各成分的體積（毫升） | |||||
凝膠體積 | 5 | 10 | 15 | 20 | 25 | 30 |
蒸餾水 | 2.3 | 4.6 | 6.9 | 9.3 | 11.5 | 13.9 |
30%丙烯酰胺混合液 | 1.3 | 2.7 | 4.0 | 5.3 | 6.7 | 8.0 |
1.5mol/L Tris（pH8.8） | 1.3 | 2.5 | 3.8 | 5.0 | 6.3 | 7.5 |
10%SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 |
10%過(guò)硫酸銨 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 |
TEMED | 0.003 | 0.006 | 0.009 | 0.012 | 0.015 | 0.018 |
配制10%的PAGE分離膠
成分 | 所需各成分的體積（毫升） | |||||
凝膠體積 | 5 | 10 | 15 | 20 | 25 | 30 |
蒸餾水 | 1.9 | 4.0 | 5.9 | 7.9 | 9.9 | 11.9 |
30%丙烯酰胺混合液 | 1.7 | 3.3 | 5.0 | 6.7 | 8.3 | 10.0 |
1.5mol/L Tris（pH8.8） | 1.3 | 2.5 | 3.8 | 5.0 | 6.3 | 7.5 |
10%SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 |
10%過(guò)硫酸銨 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 |
TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.01 | 0.012 |
配制12%的PAGE分離膠
成分 | 所需各成分的體積（毫升） | |||||
凝膠體積 | 5 | 10 | 15 | 20 | 25 | 30 |
蒸餾水 | 1.6 | 3.3 | 4.9 | 6.6 | 8.2 | 9.9 |
30%丙烯酰胺混合液 | 2.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 10.0 | 12.0 |
1.5mol/L Tris（pH8.8） | 1.3 | 2.5 | 3.8 | 5.0 | 6.3 | 7.5 |
10%SDS | 0.05 | 0.1 | 0.015 | 0.2 | 0.25 | 0.3 |
10%過(guò)硫酸銨 | 0.05 | 0.1 | 0.015 | 0.2 | 0.25 | 0.3 |
TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.01 | 0.012 |
配制15%的PAGE分離膠
成分 | 所需各成分的體積（毫升） | |||||
凝膠體積 | 5 | 10 | 15 | 20 | 25 | 30 |
蒸餾水 | 1.1 | 2.3 | 3.4 | 4.6 | 5.7 | 6.9 |
30%丙烯酰胺混合液 | 2.5 | 5.0 | 7.5 | 10.0 | 12.5 | 15.0 |
1.5mol/L Tris（pH8.8） | 1.3 | 2.5 | 3.8 | 5.0 | 6.3 | 7.5 |
10%SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 |
10%過(guò)硫酸銨 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 |
TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.001 | 0.012 |
3. 按照如下表格配制SDS-PAGE的濃縮膠（也稱(chēng)上層膠、積層膠或堆積膠）
配制不同體積的濃縮膠
成分 | 所需各成分的體積（毫升） | |||||
凝膠體積 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 8 |
蒸餾水 | 1.4 | 2.1 | 2.7 | 3.4 | 4.1 | 5.5 |
30%丙烯酰胺混合液 | 0.33 | 0.5 | 0.67 | 0.83 | 1.0 | 1.3 |
1.0mol/L Tris（pH6.8） | 0.25 | 0.38 | 0.5 | 0.63 | 0.75 | 1.0 |
10%SDS | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 | 0.08 |
10%過(guò)硫酸銨 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 | 0.08 |
TEMED | 0.002 | 0.003 | 0.004 | 0.005 | 0.006 | 0.008 |
