Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒 NobleRyder P0020
北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒 NobleRyder P0020量大優(yōu)惠，咨詢(xún) ：
Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒 NobleRyder P0020
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Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒
組成 包裝（2500微孔） 保存
5×G250染色液 100ml 2-8℃
PBS稀釋液 30ml 2-8℃
蛋白標(biāo)準(zhǔn)（5mg/ml BSA） 1ml -20℃
本試劑盒自訂購(gòu)之日起九個(gè)月內(nèi)有效。本試劑盒用于酶標(biāo)板或者200ul比色皿時(shí)可做2500孔。當(dāng)使用2ml比色皿時(shí)可做250孔，如果是1ml比色皿時(shí)可做500孔。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
考馬斯亮蘭G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合，使染料的zui大吸收峰的位置（lmax），由465nm變?yōu)?95nm，在一定的濃度范圍內(nèi)，測(cè)定的吸光度值A(chǔ)595，與蛋白質(zhì)濃度成正比。Bradford法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。樣品中巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M，二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá)5mM。但受略高濃度的去垢劑影響。需確保SDS低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒。
操作說(shuō)明：
一，微孔酶標(biāo)儀法
1. *溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，取10ml，加240ulPBS稀釋至250ml ，使終濃度為0.2mg/ml。待測(cè)蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡(jiǎn)便起見(jiàn)，也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
2. 5×G250染色液使用前請(qǐng)顛倒3-5次混勻，取1ml 5×G250染色液，加入4ml雙蒸水，混勻成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3. 將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分別加到96孔板中，加PBS稀釋液補(bǔ)足到20微升。
4. 將樣品作適當(dāng)稀釋?zhuān)ǘ嘧鰩讉€(gè)梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋?zhuān)?，?0微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時(shí)的誤差，標(biāo)準(zhǔn)線前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確，所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線1/2后。
5. 各孔加入200微升稀釋后的1×G250染色液，室溫放置3-5分鐘。
6. 用酶標(biāo)儀測(cè)定A595，或560-610nm之間的其它波長(zhǎng)的吸光度。
7. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。
二，分光光度計(jì)法
如沒(méi)有酶標(biāo)儀，可用分光光度計(jì)在離心管中混勻后加入比色皿中比色。
步驟如下：
1，取八支（或者更多）干凈的10ml離心管，標(biāo)記上號(hào)。
2，取100ulBSA，加PBS2.4ml稀釋至終濃度為0.2mg/ml。
3，5×G250染色液使用前請(qǐng)顛倒3-5次混勻，取10ml 5×G250染色液，加入40ml雙蒸水，混勻成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
4，按下表加入試劑（以每孔5ml計(jì)，多余的用來(lái)潤(rùn)洗比色皿）
離心管號(hào) 1 2 3 4 5 6 7（樣品管1） 8（樣品管2） 9（樣品管3）
標(biāo)準(zhǔn)蛋白BSA 0 100ul 200ul 300ul 400ul 500ul 500ul適當(dāng)稀釋的樣品1 500ul適當(dāng)稀釋的樣品2 ……
PBS 500ul 400ul 300ul 200ul 100ul 0 0 0 0
1×G250染色液 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml
5，反應(yīng)3分鐘后測(cè)OD值。為了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，可每間隔2分鐘加一管染色液，每間隔2分鐘測(cè)一管OD值。如下表。
離心管號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 ……
加染色液（分鐘） 0 2 4 6 8 10 12 14 ……
測(cè)OD值 3 5 7 9 11 13 15 17 ……
北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū)，是一家專(zhuān)業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)耗材及實(shí)驗(yàn)儀器研發(fā)、銷(xiāo)售、服務(wù)為一體的生物科技公司，公司主要經(jīng)營(yíng)的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas（MBI）, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等；產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測(cè)常用試劑、實(shí)驗(yàn)室常用耗材及儀器。
